viernes, 17 de julio de 2020

Prueba PCR para el Lupus Eritematoso Sistémico.

Prueba PCR para el diagnóstico de LES.

Tema (T):

Diagnóstico de Lupus Eritematoso Sistémico en relación a polimorfismos Na1 y Na2 en pacientes bolivianos.

Objetivos (O):

Identificar y establecer la existencia de la asociación de los polimorfismos Na1 y Na2 del receptor FcyRiiib con susceptibilidad al LES.

Tipo de Muestra Biológica (M):

Se recolectó una cantidad de 5 ml de sangre venosa en tubos Vacutainer anticoagulados con EDTA.3K.

Secuencia o Gen a amplificar (G):

Se realizó una tipificación genética del receptor FcyRiiib para los alelos Na1 y Na2 según el protocolo de Hong y col. De los alelos específicos para los antígenos:

NA1 Sentido 5’ CTC AAT GGT ACA GGG TGC TC 3’

NA1 Anti Sentido 5’ GGC CTG GCT TGA GAT GAG GT 3’

NA2 Sentido 5’ CTC AAT GGT ACGGCG TGC TT 3’ 

NA2 Anti sentido 5’ CAC CTG TAC TCT CCA CTG TCG TT 3’

Tipo de Ácido Nucleico a ser extraído (AN):

ADN genómico de los pacientes

Extracción (Ex):

Se aisló el ADN con el uso del kit comercial Wizard Genomic DNA purification del Instituto SELADIS.

Tipo de PCR (PCR):

Se usó una PCR-RFLP en un termociclador PX2 en 30 ciclos con Desnaturalización a 94°C en 1 min. Hibridación a 63°C por 1 min. Elongación a 72°C por 1 min.

Y una extensión final a 72°C por 10 min,

Visualización (V):

Se visualizó por electroforesis en gel de agarosa al 2.5% a un voltaje constante de de 3V/cm en tapón TBE 1X que generó 118 pb en NA1 y 171 pb en NA2 en una longitud de onda de 254 nm.


Referencias Bibliográficas:

Yanarico J.; Luna M.; Sosa L.; Terán M.; Relación de los polimorfismos Na1 y Na2 del receptor FcyRiiib con lupus eritematoso sistémico en pacientes bolivianos. Rev.Cs.Farm. y Bioq.  [revista en la Internet]. Junio de 2016 [Citado  el 17 de  Julio de 2020] ;  4(1): 85-92. Disponible en: http://www.revistasbolivianas.org.bo/pdf/rcfb/v4n1/v4n1_a08.pdf